โรงเรียนบ้านหนองสีนวล

หมู่ 5 บ้านหนองสีนวล ต.ด่านทับตะโก อ.จอมบึง จ.ราชบุรี 70150

Mon - Fri: 9:00 - 17:30

032 228642

ดีเอ็นเอ อิเล็กโทรโฟรีซิสของชิ้นส่วนดีเอ็นเอและวิธีการวินิจฉัยดีเอ็นเอ

ดีเอ็นเอ อิเล็กโทรโฟรีซิสของชิ้นส่วนดีเอ็นเอ ทำให้แน่ใจว่าการแยกชิ้นส่วนเหล่านี้เมื่อกระจายอยู่บนพื้นผิว ของเจลอะกาโรสหรือโพลีอะคริลาไมด์ ชิ้นส่วนของดีเอ็นเอเคลื่อนที่ในเจลในสนามไฟฟ้าคงที่ จากขั้วลบไปยังขั้วบวกขึ้นอยู่กับขนาด ยิ่งน้ำหนักโมเลกุลสัมพัทธ์ของชิ้นส่วนมากเท่าใด การเคลื่อนที่ในสนามไฟฟ้าก็จะยิ่งช้าลงเท่านั้น หลังจากสิ้นสุดอิเล็กโตรโฟรีซิส แต่ละชิ้นส่วนของดีเอ็นเอ จะอยู่ในตำแหน่งที่แน่นอนในรูปแบบของแถบแยก

ในตำแหน่งเฉพาะบนเจล ความยาวของชิ้นส่วนแต่ละชิ้นสามารถกำหนดได้ โดยการเปรียบเทียบระยะทางที่ชิ้นส่วนเดินทางกับระยะทางที่ตัวอย่าง ดีเอ็นเอมาตรฐานของขนาดที่ทราบเดินทาง การแสดงภาพและการระบุชิ้นส่วนดีเอ็นเอในเจลกลายเป็นขั้นตอนสุดท้าย ของการวินิจฉัยหรือเป็นองค์ประกอบของการวิเคราะห์เพิ่มเติม การแสดงภาพชิ้นส่วนดีเอ็นเอหลัง PCR ทำได้ค่อนข้างง่าย หลังจากสิ้นสุด PCR จะมีการดำเนินการอะกาโรส เจลอิเล็กโทรโฟรีซิส

ดีเอ็นเอ

หลังจากนั้นเจลจะได้รับการรักษาด้วยเอทิเดียมโบรไมด์ ซึ่งจับกับดีเอ็นเอเมื่อฉายรังสีอัลตราไวโอเลตบนผิวเจล จะตรวจพบการเรืองแสงในบริเวณสีแดงของสเปกตรัม นอกจากนี้ ยังมีการพัฒนาวิธีการอื่นๆในการย้อมสีชิ้นส่วน PCR ในบางวิธีสามารถลงทะเบียนผลลัพธ์โดยอัตโนมัติได้ การระบุชิ้นส่วนเฉพาะในเจลระหว่างจีโนมดีเอ็นเอนั้นยากกว่า เนื่องจากจีโนมมนุษย์มีขนาดใหญ่ ดังนั้น ชิ้นส่วนข้อจำกัดจำนวนมากจึงเกิดขึ้น หลังจากการจำกัดว่าเจลอะกาโรส

หลังจากอิเล็กโตรโฟรีซิส และการย้อมด้วยเอทิเดียมโบรไมด์ในรังสีอัลตราไวโอเลตจะดูมากหรือน้อย สีสม่ำเสมอ ตรวจพบชิ้นส่วนดีเอ็นเอเฉพาะโดยการผสมพันธุ์ เทคนิคนี้ประกอบด้วยขั้นตอนต่อไปนี้ หลังจากสิ้นสุดอิเล็กโตรโฟรีซิส เจลจะถูกวางในสารละลายเบสอัลคาไลน์ ซึ่งชิ้นส่วนดีเอ็นเอที่มีเกลียวคู่สูญเสียพันธะและกลายเป็นสายเดี่ยว การถ่ายโอนดีเอ็นเอจากเจลไปยังไนโตรเซลลูโลส หรือตัวกรองไนลอนจะดำเนินการในสารละลายบัฟเฟอร์

ตัวกรองและกระดาษกรอง 1 ปึกวางลงบนพื้นผิวของเจลโดยตรง อันเป็นผลมาจากผลกระทบของเส้นเลือดฝอย กระแสบัฟเฟอร์จะถูกสร้างขึ้นในแนวตั้งฉากกับระนาบของเจล ตัวกรองจะเก็บดีเอ็นเอที่ถูกชะล้างออกจากเจล และปรากฏบนพื้นผิวเกือบทั้งหมด หลังจากการถ่ายโอนเส้นเกลียวเดี่ยวจะได้รับการแก้ไขบนตัวกรอง ตำแหน่งของชิ้นส่วนบนตัวกรอง ตรงกับตำแหน่งในเจลทุกประการ เพื่อที่จะระบุชิ้นส่วนที่ต้องการด้วยสายตา มองไม่เห็นดีเอ็นเอที่ยึดติดกับตัวกรอง

การผสมพันธุ์จะดำเนินการ ด้วยเรดิโอนิวไคลด์ที่ติดฉลากซึ่งจำเพาะสำหรับลำดับนิวคลีโอไทด์ หรือฉลากเรืองแสงที่มีโพรบสังเคราะห์โอลิโกนิวคลีโอไทด์ โพรบดังกล่าวประกอบด้วย 16 ตัว 30 คู่เบสหรือชิ้นส่วนดีเอ็นเอโคลน ลำดับนิวคลีโอไทด์ของโพรบต้องเป็นส่วนเสริมทั้งหมด หรือบางส่วนกับบริเวณของจีโนมดีเอ็นเอที่กำลังศึกษา เมื่อตัวกรองถูกบ่มด้วยสารละลายที่มีโพรบที่มีฉลาก การผสมระหว่างสายดีเอ็นเอที่สมบูรณ์ของโพรบ รวมถึงชิ้นส่วนบนตัวกรองจะเกิดขึ้น

โมเลกุลโพรบที่ไม่จับกันโดยเฉพาะ จะถูกชะล้างออกโดยใช้ขั้นตอนพิเศษ พื้นที่ที่มีการติดฉลากกัมมันตภาพรังสีจะถูกตรวจพบ โดยการให้ตัวกรองสัมผัสกับฟิล์มเอกซเรย์ การถ่ายภาพด้วยรังสีอัตโนมัติ หลังจากพัฒนาแล้ว แถบของดีเอ็นเอ ที่ติดฉลากโพรบจะปรากฏให้เห็นบนแผ่นฟิล์ม ฉลากที่ไม่มีสารกัมมันตภาพรังสีสามารถมองเห็นได้ จากการเรืองแสงหรือโดยอ้อมจากแอนติบอดี วิธีการวินิจฉัยดีเอ็นเอทางตรงและทางอ้อม การวินิจฉัยดีเอ็นเออาจเป็นการตรวจยืนยัน

ตรวจก่อนแสดงอาการก่อนคลอด และตรวจวินิจฉัยดีเอ็นเอพาหะ โดยพื้นฐานแล้วการวินิจฉัยดีเอ็นเอทางตรงและทางอ้อม ของโรคทางพันธุกรรมที่เป็นโมโนเจนนั้นมีความโดดเด่น วิธีการโดยตรงเป็นไปได้ก็ต่อเมื่อยีนของโรคถูกโคลน การจัดระเบียบของเอ็กซอนอินตรอน หรือลำดับนิวคลีโอไทด์ของดีเอ็นเอเสริม ที่มีความยาวเต็มที่เป็นที่ทราบ ในการวินิจฉัยโดยตรงการกลายพันธุ์ของยีนเป็นเรื่องของการวิเคราะห์ อย่างไรก็ตาม สำหรับโรคทางกรรมพันธุ์จำนวนหนึ่ง

ยีนนั้นไม่ได้ถูกโคลนหรือเป็นโรค ที่ต่างกันทางพันธุกรรม เช่น เนื่องจากความเสียหายในยีนต่างๆ หรือการจัดระเบียบระดับโมเลกุลของยีนไม่อนุญาตให้ใช้วิธีการโดยตรง ความยากลำบากเหล่านี้สามารถเอาชนะได้ โดยใช้วิธีการวินิจฉัยดีเอ็นเอทางอ้อม โดยใช้เครื่องหมายโพลีมอร์ฟิคที่เชื่อมโยงกับยีน ในกรณีนี้ แฮ็ปโลไทป์ของโครโมโซมที่มียีนกลายพันธุ์ ถูกกำหนดในครอบครัวที่มีความเสี่ยงสูง เช่น ผู้ปกครองของผู้ป่วยและครอบครัวใกล้ชิดของเขา

วิธีการนี้เป็นไปได้สำหรับโรคโมโนเจนิก เกือบทั้งหมดที่รู้จักการแปลยีน วิธีการวินิจฉัยการกลายพันธุ์โดยตรง ปัจจุบันมีการใช้วิธีการโดยตรง 2 ประเภทในการวินิจฉัยดีเอ็นเอ การกลายพันธุ์ที่เปลี่ยนความยาวของชิ้นส่วนดีเอ็นเอขยาย ซึ่งตรวจพบโดยการวิเคราะห์ด้วยไฟฟ้า ตรวจพบได้ง่ายที่สุด วิธีการตรวจหาการกลายพันธุ์ที่ทราบ หากทราบการกลายพันธุ์ ก็สามารถตรวจพบได้โดยใช้เอนไซม์จำกัดที่รับรู้ลำดับนิวคลีโอไทด์ ที่กำหนดไว้อย่างเคร่งครัด

ขึ้นอยู่กับการผสมพันธุ์ของดีเอ็นเอ การวิเคราะห์ข้อจำกัดเป็นวิธีที่ง่ายที่สุด ในการตรวจจับการกลายพันธุ์โดยตรง สาระสำคัญของมันอยู่ที่ความจริงที่ว่าเอ็นโดนิวคลีเอสที่มีข้อจำกัด เอ็นไซม์ของแบคทีเรียจะตัดสายคู่ของดีเอนเอในลำดับที่แน่นอนของนิวคลีโอไทด์ 4 ถึง 8 สาย การตัดดีเอ็นเอกลายพันธุ์ทำให้ได้ส่วน ที่มีความยาวแตกต่างจากส่วนปกติ ซึ่งแสดงไว้บนอิเล็กโทรโฟเรแกรม หากตำแหน่งข้อจำกัดมีนิวคลีโอไทด์แบบโพลีมอร์ฟิค

การกลายพันธุ์นี้สามารถตรวจพบได้อย่างแน่นอน ถ้านิวคลีโอไทด์โพลีมอร์ฟิคอยู่ในบริเวณ ที่เอนไซม์ข้อจำกัดไม่รู้จัก วิธีการวิเคราะห์ข้อจำกัดจะไม่สามารถใช้ได้ PCR เฉพาะอัลลีลใช้เพื่อตรวจหาจุดกลายพันธุ์ การลบขนาดเล็กและการแทรกในยีนที่ทำการศึกษา PCR ช่วยให้คุณสามารถเพิ่มลำดับ ดีเอ็นเอ ที่ไม่ซ้ำกันซ้ำๆแล้วจึงวิเคราะห์หาการกลายพันธุ์ การใช้ไพรเมอร์โอลิโกนิวคลีโอไทด์ที่เฉพาะเจาะจง การขยายขอบเขตการเข้ารหัส ของจีโนมดีเอ็นเอจะดำเนินการ

ทำหน้าที่เป็นตัวควบคุมเชิงบวก ซึ่งบ่งชี้ถึงการขยายตามปกติ นอกจากวิธีการโดยตรง 2 วิธีในการตรวจจับการกลายพันธุ์ที่ทราบที่กล่าวถึงข้างต้นแล้ว ยังมีวิธีการอื่นๆอีกหลายวิธีที่มีความแม่นยำ ไม่ลดลงแต่ต้องใช้ความพยายามมากกว่า นี่คือการวิเคราะห์ข้อจำกัด PCR เฉพาะอัลลีล PCR แบบเรียลไทม์ หัววัด Tag Man การผสมข้ามพันธุ์กับโอลิโกนิวคลีโอไทด์จำเพาะอัลลีล ปฏิกิริยาลิเกสจำเพาะอัลลีล การหาลำดับที่น้อยที่สุด การหาลำดับไพโรโรส

ลักษณะของวิธีการเหล่านี้ สามารถพบได้ในวรรณกรรมเฉพาะทาง ความไวและความจำเพาะของวิธีการนั้นสูงที่พบบ่อยที่สุดคือ 3 การวิเคราะห์ข้อจำกัด PCR เฉพาะอัลลีลและ PCR แบบเรียลไทม์ แพทย์ในห้องปฏิบัติการหรือนักวิจัยในแต่ละกรณีจะหยุดที่วิธีการใดวิธีหนึ่งแล้ว สามารถเปลี่ยนไปใช้วิธีอื่นได้ วิธีการทั้งหมดมีความแม่นยำมาก สิ่งเหล่านี้ช่วยให้คุณระบุการกลายพันธุ์ของดีเอ็นเอได้อย่างชัดเจน แม้ว่าความแตกต่างจะเป็นฐานเดียวก็ตาม

อ่านต่อได้ที่ การกลายพันธุ์ ผลกระทบหลักกลายพันธุ์จากมุมมองทางพันธุกรรม